离心机是生物学教学及科研领域中的常见仪器，离心技术也是分离、制备、纯化生物样品的重要手段。下面小编给大家介绍一下实验室常用离心法之差速离心法:

　　一、原理

　　差速离心是根据颗粒大小和密度不同造成沉降速度(即沉降系数)的差异，通过分级提高离心转速或高速与低速离心交替进行，使具有不同质量的颗粒样品(或大分子)从混合液中分批沉降至管底，从而实现分离目的。

　　

 

二、适用条件

　　该方法适用于混合样品中各沉降系数差别较大的组分之间的分离，更准确地说是沉降系数差别在1至几个数量级的混合样品的分离，差别越大，分离效果越好。

　　三、使用方法

　　差速离心法一般采用固定角转子，通过较低速度的离心沉淀，最重的颗粒将全部沉到管底。继续将上清液以更高的转速沉淀，即可得到次重的颗粒样品。逐步增加离心转速，即可分别得到不同重量的样品颗粒，以达到分离的目的。

　　通常为了得到较纯的颗粒样品，还需要将沉淀重悬，用相同的转速再次沉淀。重复几次之后即可得到大小基本均一的颗粒。

　　但是一般在实际使用中，差速离心通常不用于精细分离，仅用于s值相差1个数量级及以上的2种颗粒的分离，且沉淀不能实现完全回收。

　　四、应用范围

　　差速离心技术的应用十分普遍，尤其是针对有生物活性物质的分离、粗提和浓缩，例如：

　　动植物病毒

　　各种亚细胞组分(细胞核、叶绿体、线粒体等)

　　核酸

　　蛋白质，等

　　五、应用实例

　　马铃薯线粒体的制备

　　取马铃薯块茎200克，加入2.5倍体积的匀浆缓冲液，匀浆后用4层纱布过滤。滤液经4000rpm离心10分钟 ,收集上清液。

　　上清液13800×g(相对离心力RCF,即重力加速度g的倍数)离心15分钟收集沉淀，用缓冲液重悬并加入终浓度为15mmol/L的氯化镁。

　　经DNase I处理后，加入2倍体积的缓冲液，13800×g离心15分钟收集沉淀，即为线粒体。

　　可成实验室离心机型号H3-20K就能满足一般实验室实验的需求。

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