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实验室离心机常用离心法之差速离心法

发布时间:2019-04-24 阅读206

  离心机是生物学教学及科研领域中的常见仪器,离心技术也是分离、制备、纯化生物样品的重要手段。下面小编给大家介绍一下实验室常用离心法之差速离心法:

  一、原理

  差速离心是根据颗粒大小和密度不同造成沉降速度(即沉降系数)的差异,通过分级提高离心转速或高速与低速离心交替进行,使具有不同质量的颗粒样品(或大分子)从混合液中分批沉降至管底,从而实现分离目的。

  

实验室离心机常用离心法之差速离心法 

二、适用条件

  该方法适用于混合样品中各沉降系数差别较大的组分之间的分离,更准确地说是沉降系数差别在1至几个数量级的混合样品的分离,差别越大,分离效果越好。

  三、使用方法

  差速离心法一般采用固定角转子,通过较低速度的离心沉淀,最重的颗粒将全部沉到管底。继续将上清液以更高的转速沉淀,即可得到次重的颗粒样品。逐步增加离心转速,即可分别得到不同重量的样品颗粒,以达到分离的目的。

  通常为了得到较纯的颗粒样品,还需要将沉淀重悬,用相同的转速再次沉淀。重复几次之后即可得到大小基本均一的颗粒。

  但是一般在实际使用中,差速离心通常不用于精细分离,仅用于s值相差1个数量级及以上的2种颗粒的分离,且沉淀不能实现完全回收。

  四、应用范围

  差速离心技术的应用十分普遍,尤其是针对有生物活性物质的分离、粗提和浓缩,例如:

  动植物病毒

  各种亚细胞组分(细胞核、叶绿体、线粒体等)

  核酸

  蛋白质,等

  五、应用实例

  马铃薯线粒体的制备

  取马铃薯块茎200克,加入2.5倍体积的匀浆缓冲液,匀浆后用4层纱布过滤。滤液经4000rpm离心10分钟 ,收集上清液。

  上清液13800×g(相对离心力RCF,即重力加速度g的倍数)离心15分钟收集沉淀,用缓冲液重悬并加入终浓度为15mmol/L的氯化镁。

  经DNase I处理后,加入2倍体积的缓冲液,13800×g离心15分钟收集沉淀,即为线粒体。

  可成实验室离心机型号H3-20K就能满足一般实验室实验的需求。







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