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台式低温高速离心机如何提取与制备蛋白质

发布时间:2019-06-17 阅读64

台式低温高速离心机实验室最常见的必备仪器,今天由上海赵迪技术人员向大家介绍台式低温高速离心机如何提取与制备蛋白质。

蛋白质样品制备

秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等(1986)的方法进行。

100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂,用液氮研磨成粉,加入1.5ml10%三氯乙酸(丙酮配制,含10mM即0.07%β-巯基乙醇),混匀,-20℃沉淀1小时,4℃,15000r/min离心15min,弃上清,沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-巯基乙醇),再于-20℃沉淀1小时,同上离心弃上清,(有必要再用80%丙酮(含10mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。

     

按每mg干粉加入20μl(可调)UKS液[9.5M尿素,5mM碳酸钾,1.25%SDS,0.5%DTT(二硫苏糖醇),2%Ampholine(AmershamPharmaciaBiotechInc,pH3.5-10),6%TritonX-100],37℃温育30min,期间搅动几次,28度(温度低,高浓度的尿素会让溶液结冰)16000r/min离心15min,离心力越大时间长一点越好!上清即可上样电泳。或者-70度保存。

 H1-16KR.2.jpg

植物根中蛋白质的抽取

(1)sample,液氮研磨

(2)装1.5mlcentrifuge用tube

(3)加1MKH2PO4K2HPO4700ul

(4)12000rpm,4度,10-15minite

(5)取上层液,蛋白质就在里面





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