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密度梯度离心法、速率区带离心法和等密度区带离心法怎么理解

发布时间:2022-11-28 阅读58

密度梯度离心法、速率区带离心法和等密度区带离心法怎么理解?

密度梯度离心法可分为速率区带离心法和等密度区带离心法。

一、密度梯度离心法(又称区带离心法)

原理:不同颗粒之间存在沉降系数差时,在一定离心力作用下,在一定惰性梯度介质中,颗粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同区域上形成区带的方法。


密度梯度离心法的优点是:具有很好的分辨率,分离效果好,可一次获得较纯颗粒;

适用范围广,既能分离沉淀系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度的颗粒;

颗粒不会积压变形,能保持颗粒活性,并防止已形成的区带由于对流而引起混合。

密度梯度离心法的缺点:

离心时间较长;

需要制备梯度液;

操作严格,不宜掌握。


二、速率区带离心法

原理:分离的粒子在离心力作用下,在梯度液中沉降速度的不同,离心后具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内形成几条分开的样品区带,达到彼此分离的目的。

临床上单核细胞分离常使用这个方法。使用的分离液是Ficoll、Percoll及蔗糖。把静脉血中单个核细胞分离出来,前一种分离液将血液中单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)分为一个层,同时提出。而Percoll分离液将血中淋巴细胞和单核细胞分为二个梯度层,分别提取。后者分离效果优于前者,但操作繁琐。

密度梯度离心法.jpg

三、等密度区带离心法

原理:不同颗粒存在浮力密度差,在离心力场下,颗粒或向下沉降,或向上浮起,一直沿梯度移动到它们密度恰好相等的位置上(即等密度点)形成区带。

等密度区带离心的有效分离取决于颗粒的浮力密度差,密度差越大,分离效果越好,与颗粒的大小和形状无关,但后两者决定着达到平衡的速率、时间和区带的宽度。

密度梯度离心法-2.jpg

               





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