一、实验材料：叶绿素厂废液、石油醚、层析用氧化铝、丙酮、乙醇、环己烷。

　　二、实验器材：台式离心机、离心管、天平、灰化炉、玻璃棒、玻璃层析柱、分液漏斗、紫外可见光分光光度计。

　　三、实验内容：

　　1．废液的预处理：取叶绿素厂废液5mL于台式离心机离心管中，置于台式离心机中，进行平衡操作后，1000 r/min离心15min。取上层黄色液体于50ml梨形分液漏斗中。加25ml石油醚(沸程为30一60℃)，充分混匀。

　　2．氧化铝层析柱的准备：取100g氧化铝于灰化炉中加热至400℃，保持3h，使水分完全蒸发成活性氧化铝。此时的氧化铝为Ⅰ级，适当吸收空气中的水分(约3％)后，成Ⅱ级，然后，用石油醚将活性氧化铝调制成糊状，备用。另取1支20 mm×300 mm的玻璃层析柱，关闭阀门，加入三分之一体积的石油醚、再将糊状的话性氧化铝慢慢地加入到玻璃层析柱中，同时打开层析柱的阀门，让中中的石油醚慢慢地流出，有利于氧化铝的沉降。当氧化铝装至层析柱的8D％时，停止加氧化铝，待氧化铝完全沉降。

　　3．加样层析和洗脱：装好层析柱，同时打开层析柱的阀门和分液漏斗的阀门，使分液漏斗中的样品慢慢地加入到氧化铝层析柱中。观察氧化铝由于加入样品后颜色的变化。当前沿的颜色伸展至柱高度的二分之一时，关闭分液漏斗和层析柱的阀门，停止加样。另取1个250mL分液漏斗，内装石油醚:丙酮＝9:l的混合溶液作为洗脱剂，安装好层析装置，分别打开分液漏斗和层析柱的阀门，让洗脱剂慢慢流经层析柱。当颜色前沿到达层祈柱底部时，注意观察并记录色带的分离情况。第一条带(从底部往上数)，是α-胡萝卜素，第二条带是β-胡萝卜素，第三条带是γ—胡萝卜素，再往上是其他类胡萝卜素及其他色素。本实验要求收集β-胡萝卜素组分。用50mL烧杯收集β-胡萝卜素洗脱液。

　　4.沉淀：将洗脱液于50℃水浴中加热使溶剂挥发．然后，在残留物中加氯仿使之溶解后再用乙醇沉淀，如发现有白色沉淀物质产生，需用台式离心机，控制转速在2000r/min状态下进行离心将其去除。在上清液中再加乙醇，得到的棕褐色沉淀，即为β-胡萝卜素。称量，记录总重量。

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